乙肝病毒基因组为松散的环状双链DNA（relaxd circular DNA，RC DNA），在宿主细胞核内形成cccDNA作为转录模板，形成乙肝病毒扩增所必需的前基因组RNA（pregenomic RNA，pgRNA）和亚基因组RNAs，PgRNA依次经反转录形成负链DNA、DNA复制形成双链DNA,完成病毒基因组的扩增过程，而亚基因组RNAs负责编码衣壳蛋白、外膜蛋白及X蛋白，协同完成HBV病毒颗粒的组装。2009年，韩国延世大学Wang-Shick Ryu教授课题组首次报道了通过AAV携带乙肝病毒基因组的方式模拟乙肝病毒感染的过程[4,5]。枢密科技利用AAV基因组能在宿主细胞中稳定存在的特性以及8型AAV强嗜肝性的特点，开发了携带1.3拷贝HBV全长基因组的腺相关病毒产品rAAV-HBV1.3-mer WT replicon系列产品。该系列产品模拟了pgRNA的形成，更贴近病毒天然的生活周期，能稳定建立乙肝病毒长期感染的状态，加速乙肝复制机制的研究及抗乙肝药物研发的进程。

1. 分子构建

2. 效果验证

通过小鼠眼眶采血检测血清中乙肝病毒标记物HBsAg、HBeAg和DNA含量。结果显示rAAV-HBV1.3-mer WT replicon注射后3-4d即可检测到乙肝病毒的表达，且表达时间持续7周，实验结果稳定，个体差异性小。

枢密的生产系统、质控系统都严格按照标准文件执行，可确保产品质量和批次间的稳定性。该系统不含人源细胞系，避免了生产过程中产生野生型HBV病毒颗粒的风险，安全性更高。此系统可实现大规模的生产，而且具有较高的产率和稳定性。

腺相关病毒产品采用碘克沙醇密度梯度离心纯化，通过荧光定量PCR检测AAV基因组ITR序列测定滴度（见图3），并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）银染检测产品纯度，如图4所示，rAAV-HBV1.3-mer WT replicon三条特征条带清晰，纯度≥97%。

图4  SDS-PAGE银染检测rAAV-HBV1.3-mer WT replicon纯度，AAV的外壳由VP1、VP2、VP3三种蛋白按1:1:10比例组成，大小分别是87 KD、73 KD、62KD，三条带灰度值越接近上述比例，病毒纯度越高。

产品信息

备注：可根据客户不同需求定制HBV基因组点突变株，助力科研及抗病毒药物开发！

产品特点

适用模型：慢性乙肝模型、HBV持续复制模型，可用于研究乙肝病毒复制机制及抗乙肝药物的开发；

缺点：无HBV感染过程；

常用小鼠品系及注射剂量：C57BL/6、Balb/c；≥10¹¹ vg/mouse。

1、重组腺相关病毒属于复制缺陷型假病毒载体，但rAAV-HBV1.3-mer WT replicon携带致病基因，其病毒产品和受感染的动物对人具有感染性和致病性，应在生物安全二级条件下操作使用，运输过程也需做到隔离防护。

2、操作人员需要经过专业的生物安全培训并获得生物安全培训合格证，严格按照生物安全实验规程和手册进行操作。建议操作人员接种乙型肝炎疫苗以获得乙肝免疫能力。

3、感染了rAAV-HBV1.3-mer WT replicon的小鼠排泄物等可能含有HBV病毒，该HBV病毒对包括人在内的灵长类动物有潜在感染性和致病性，对树鼩、鸭子等动物的均具有感染性，故实验动物及废弃物的处理需要严格遵循生物安全实验规程。

4、该病毒产品及其动物模型的使用单位应该有生物安全二级实验室资质。

1、病毒采用干冰运输，通常1-2天送达。

2、病毒可在4℃短期保存1-2周，但滴度会有4-5倍的降低。长期保存需存放于-80℃。每冻融一次，病毒滴度降低10%左右，应避免反复冻融。

3、理论上，病毒可于-80℃保存6个月以上，但病毒储存时间超过6个月后，建议在使用前重新测定滴度。

4、分装保存，避免反复冻融。

5、避免细菌、蛋白酶等污染。