HDV基因组只编码HDAg蛋白，HDAg有2种形式：S-HDAg（195AA）和L-HDAg（214AA）。S-HDAg 196AA处终止密码子UAG被宿主细胞ADAR-1介导的RNA编辑将其序列改为UGG，从而将C端延长了19AA形成了L-HDAg。S-HDAg参与病毒复制，L-HDAg参与病毒粒子的组装，因此RNA编辑是HDV复制的核心，通过控制2种不同亚型的蛋白来调控病毒复制和颗粒组装之间的平衡。HDV病毒基因组内部折叠成类病毒棒状结构，该结构与S-HDAg和L-HDAg相结合形成核糖核蛋白（RNP）复合物，与HBsAg组装成完整的病毒颗粒。由于临床上HBV/HDV合并感染的患者伴随着较为严重的肝损伤，而传统的HDV转基因小鼠模型不能稳定表现出该表型，因此也限制了临床药物的开发。近期有研究组用rAAV递送HBV及HDV基因组来模拟HBV/HDV合并感染的过程，并表现出肝损伤[6, 7]。枢密科技利用AAV8在宿主细胞中稳定表达及强嗜肝性的特点，并结合一系列现有及自主研发（专利号：CN 111218446 A）的肝脏特异性启动子，开发了携带1.2拷贝HDV全长基因组的腺相关病毒产品rAAV-1.2×HDV一系列产品。该产品与AAV-HBV系列产品组合使用可稳定建立HBV/HDV同时感染的状态，助力HDV复制机制的研究及抗HDV药物的研发。

图1用于建立丁肝病毒感染动物模型的rAAV-1.2×HDV产品基因组结构示意图

将AAV-HBV和AAV-HDV病毒以不同组合的方式尾静脉注射至8周C57BL/6小鼠，在注射病毒后的第7，14，21，45天对血清中HDV和HBV进行定量检测。AAV-HBV/HDV实验组14天可检测到HDV基因组，并在21天时达到最高水平（A-C）。AAV-HBV/HDV合并感染后，血清中ALT水平明显增加（D），此外肝脏损伤、坏死、炎症、增殖、纤维化、肝硬化、肝癌基因表达显著增加（E），肝脏组织H&E染色也表现出小叶炎症（黑色粗箭头），细胞质肿胀（黑色细箭头）及“砂状”肝细胞核（白色细箭头）（F）。

图2用AAV-HBV/HDV合并感染建立小鼠乙肝病毒长期感染模型指标检测[6]

枢密的生产系统、质控系统都严格按照标准文件执行，可确保产品质量和批次间的稳定性。该系统不含人源细胞系，避免了生产过程中产生野生型HDV病毒颗粒的风险，安全性更高。此系统可实现大规模的生产，而且具有较高的产率和稳定性。

腺相关病毒产品采用碘克沙醇密度梯度离心纯化，通过荧光定量PCR检测AAV基因组ITR序列测定滴度（见图3），并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）银染检测产品纯度，如图4所示，rAAV-EAlb-hAAT-1.2xHDV (AG)三条特征条带清晰，纯度≥97%。

图3通过Q-PCR检测，rAAV-EAlb-hAAT-1.2xHDV (AG)的滴度为1012 vg/mL

图4 SDS-PAGE银染检测rAAV-EAlb-hAAT-1.2xHDV (AG)纯度，AAV的外壳由VP1、VP2、VP3三种蛋白按1:1:10比例组成，大小分别是87 KD、73 KD、62KD，三条带灰度值越接近上述比例，病毒纯度越高

产品信息：

备注：

（1）该模型需与AAV-HBV病毒合并使用建立丁肝感染模型。

（2）可根据客户不同需求定制不同肝脏特异性启动子启动的HDV基因组及其点突变株，助力科研及抗病毒药物开发！

产品特点：

适用模型：慢性乙肝/丁肝合并感染模型，可用于研究丁肝病毒复制机制及抗丁肝药物的开发；

缺点：无HDV感染过程；

常用小鼠品系及注射剂量：C57BL/6、Balb/c；≥ 5*10¹⁰ HBV+5*10¹⁰ HDV vg/mouse

（1）重组腺相关病毒属于复制缺陷型假病毒载体，但rAAV-HBV1.3-mer WT replicon及rAAV-1.2×HDV系列产品携带致病基因，其病毒产品和受感染的动物对人具有感染性和致病性，应在生物安全二级条件下操作使用，运输过程也需做到隔离防护。

（2）操作人员需要经过专业的生物安全培训并获得生物安全培训合格证，严格按照生物安全实验规程和手册进行操作。建议操作人员接种乙型肝炎疫苗以获得乙肝免疫能力。

（3）感染了rAAV-HBV1.3-mer WT replicon及rAAV-1.2×HDV的小鼠排泄物等可能含有HBV和HDV病毒，该病毒对包括人在内的灵长类动物有潜在感染性和致病性，故实验动物及废弃物的处理需要严格遵循生物安全实验规程。

（4）该病毒产品及其动物模型的使用单位应该有生物安全二级实验室资质。

（1）病毒采用干冰运输，通常1-2天送达。

（2）病毒可在4℃短期保存1-2周，但滴度会有4-5倍的降低。长期保存需存放于-80℃。每冻融一次，病毒滴度降低10%左右，应避免反复冻融。

（3）理论上，病毒可于-80℃保存6个月以上，但病毒储存时间超过6个月后，建议在使用前重新测定滴度。

（4）分装保存，避免反复冻融。

（5）避免细菌、蛋白酶等污染。

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